超声辅助苦荞中蛋白和黄酮的同步提取工艺（一） 荞麦分为甜荞和苦养

荞麦分为甜荞和苦养，超声苦荞又称鞑靼荞麦，辅助为一年生草本植物，苦荞高约30cm～60cm。中蛋它含有蛋白质、白和步提维生素、黄酮不饱和脂肪酸等，取工有较高的超声营养价值和保健功能。养麦粉中蛋白质所占比例约为10％～15％，辅助含有丰富的苦荞赖氨酸、精氨酸等必需氨基酸，中蛋以弥补谷类和蔬菜类蛋白质的白和步提紧缺。荞麦中也含有其它谷物中没有的黄酮芦丁、槲皮素等黄酮类物质，取工具有极高的超声药用价值和较强的抗氧化性，可以预防多种慢性疾病，如各种毛细管脆性引起的出血病、高血压和心脑血管疾病，也可以强化心血管，降低血脂和胆固醇含量。目前关于蛋白质的提取方法主要有：碱溶酸沉、酶法提取、超声辅助提取、微波辅助提取等方法。黄酮类化合物的提取方法有：碱溶酸沉、超声辅助提取、酶法提取、微波辅助提取等方法，均提取了一种物质，本实验以碱溶液作为提取剂，对苦荞中养麦蛋白和黄酮类化合物进行超声同步提取，克服了分步提取荞麦蛋白和黄酮类物质工艺的缺点，并利用响应面法优化提取工艺，为苦荞的进一步开发提供技术支撑和理论依据。

一、材料与方法

1、原料与试剂

苦荞麦：横山县陕北大地农业科技发展有限责任公司；芦丁标准品、考马斯亮蓝G250（分析纯）：源叶生物有限公司；亚硝酸钠（分析纯）：天津市福晨化学试剂厂；氢氧化钠、无水乙醇、硝酸铝、磷酸、石油醚（分析纯）：天津市天力化学试剂有限公司；牛血清蛋白（生化试剂）：天津市化学试剂四厂；盐酸（分析纯）：洛阳昊华化学试剂有限公司。

2、仪器与设备

仪器与设备见表1所示。

3、试验方法

（1）工艺流程

苦荞麦→清洗→烘干→粉碎→脱脂→碱水溶解→超声处理→离心→上清液→酸沉→沉淀→干燥→苦养蛋白和黄酮提取物

（2）苦荞中荞麦蛋白和黄酮类化合物超声同步提取条件优化方法

①粉碎粒度对苦荞蛋白和黄酮类化合物超声同步提取的影响

分别选取粉碎粒度为40目、60目、80目、100目，在液料比为30∶1mL/g，pH为9，超声时间为40min，超声温度为65℃条件下进行超声同步提取，计算得率。

②液料比对苦荞蛋白和黄酮类化合物超声同步提取的影响

分别选取液料比为10∶mL/g、20∶1mL/g、30∶1mL/g、40∶1mL/g、50∶1mL/g，在粉碎粒度为60目，pH为9，时间为40min，温度为65℃条件下进行超声同步提取，计算得率。

③pH对苦荞蛋白和黄酮类化合物超声辅助同步提取的影响

分别选取pH为7、8、9、10，在粉碎粒度为60目，液料比为30∶1mL/g，时间为40min，温度为65℃条件下进行超声同步提取，计算得率。

④时间对苦荞蛋白和黄酮类化合物超声辅助同步提取的影响分

分别选择超声时间20min、30min、40min、50min、60min、70min，粉碎粒度为60目，液料比为30∶1mL/g，超声温度为65℃条件下进行超声同步提取，计算得率。

⑤温度对苦养蛋白和黄酮类化合物超声辅助同步提取的影响

选择在35℃、45℃、55℃、65℃、75℃、85℃六个温度条件下，粉碎粒度为60目，液料比为30∶1mL/g，时间为40min进行超声同步提取，计算得率。

（3）总黄酮的测定。

（4）苦荞提取液中养麦蛋白的测定。

二、结果与分析

1、标准曲线的绘制

（1）黄酮类化合物标准曲线的绘制

得出芦丁质量浓度与吸光度之间的回归方程为：A=12.585x一0.006，R2=0.9992，根据回归方程计算总黄酮得率。

（2）苦养蛋白标准曲线的绘制

得出牛血清蛋白质量浓度与吸光度之间的回归方程为：A=5.2957x+0.004，R2=0.9993，根据回归方程计算蛋白得率。

2、苦荞中蛋白和黄酮超声同步提取条件的选择

（1）单因素试验结果

①粉碎粒度对苦养蛋白和黄酮类化合物超声同步提取的影响随着粉碎粒度的减小，苦荞蛋白和黄酮得率随之增大。当粒度达到60目时，两者得率均达到最大值，分别为8.06％和1.17％。粉碎粒度减小有助于物料与溶剂之间充分接触，促进溶解。当粒度小于60目时，粉碎机与物料之间过度摩擦，产生的热量会破坏营养物质，使苦养蛋白和黄酮类物质得率逐渐减小。所以选择60目为超声同步提取的最佳粉碎粒度。

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